MICROANALYSIS ON BIOLOGICAL MATERIAL - THE ROLE OF PREPARATION METHODS AT LOW TEMPERATURES AND A POSSIBLE LINK WITH (IMMUNO)CYTOCHEMISTRY

Résumé
Les coupes à congélation ultrafines sont idéales pour l'analyse et la localisation des éléments dans leur matrice physiologique. Le système de cryotransfert entre microtome et microscope électronique offre la possibilité d'examiner des coupes à l'état hydraté et congelé et d'observer ensuite le processus de sublimation jusqu'au séchage complet. En sublimant les coupes avant l'observation au microscope, on prend un risque de réhydratation avec les artefacts caractéristiques que celle-ci implique. Les artefacts de réhydratation peuvent être prévenus en exposant les coupes lyophilisées à des vapeurs fixatrices (formaldéhyde, le tétroxyde d'osmium par exemple). Ce procédé de fixation sèche par la vapeur a l'avantage de faciliter la conservation des échantillons en vue d'une microanalyse ultérieure et, de plus, il offre une possibilité d'application des techniques immunocytochimiques. Nous présenterons en illustration un exemple d'étude immunocytochimique et microanalytique des pancréas de rat.

Abstract
Frozen thin sections are considered the objects of choice for the study and localization of elements in their physiological matrix. A cryo-transfer system between microtome and microscope offers the possibility of studying fully hydrated sections in the frozen state and subsequently observe the sublimation process up to complete dryness. By freeze-drying sections before microscopic observation one takes the risk of rehydration with its accompanying typical artefacts. Rehydration artefacts are prevented when freeze-dried sections are exposed to vapour fixatives (e.g. formaldehyde, osmium tetroxide). A dry vapour fixation enables the safe conservation of samples for microanalysis and, in addition, offers the possibility for conducting immunocytochemical reactions on serial sections. This will be illustrated by an immunocytochemical and microanalytical study on the pancreas of the rat.